眼组织透射电子显微镜制样方法
介绍一种眼组织透射电子显微镜标本制备方法。组织先用4%多聚甲醛—2.5%戊二醛混合固定液预固定，1%四氧化锇固定液后固定，丙酮逐级脱水，延长Epon812包埋液的浸透时间并包埋，用玻璃刀或钻石刀作超薄切片，醋酸铀及枸椽酸铅双重染色。 材料 将大白鼠麻醉或断头后，立即摘去眼球，并保留视神经，其过程在2 min之内完成。 方法 1 取材与预固定 将摘出的眼球用0.1 M磷酸缓冲液(pH7.2～7.4)洗净表面的血液，立即浸入4%多聚甲醛—2.5%戊二醛混合固定液中，用4号针头沿赤道部将眼球打一小孔，将针头轻轻退出约1 mm，用空针缓缓推入预固定液，在预固定12h后，沿赤道部将眼球割成二半，分别取出各种组织，组织切成1 mm3大小，继续固定2 h，然后用3%EDTA-Na2软化20 min。 2 清洗 0.1M磷酸缓冲液反复清洗5次，每次10～20 min，并浸泡过夜。 3 后固定 1%四氧化锇固定液固定2 h(4 ℃)。 4 脱水 用30%、50%、70%的丙酮各脱水5～10 min(4℃)，90%的丙酮脱水10～15 min(室温)，100%丙酮脱水40 min(换三次)。 5 浸透 用Epon812包埋液+丙酮(3∶1)浸泡45 min(35 ℃)；纯Epon812包埋液浸泡2 h(45 ℃)。 6 包埋 将经以上步骤处理的样品，放置定向包埋模具中，方向应为保持所需眼组织的全层结构为准。加入新鲜的Epon812包埋液，使组织完全浸泡于包埋液中。 7 聚合在45 ℃下聚合10 h，在60 ℃下聚合12 h。 8 修块、半薄切片、超薄切片、染色 按常规进行，H600-Ⅳ型透射电镜观察。 优点 用该方法制备的样品，包埋块硬度适当，无过硬过脆现象，在切片过程中，切片韧性较好，切片厚度可达500～600 nm，切片颜色为浅黄色，无散片现象，包埋液浸透良好。
